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試驗九噬菌體效價的測定(張理珉)詳解.ppt 40頁

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3、試驗道理 一個噬菌體→侵染宿主細胞→惹起裂解→分散重復侵染裂解→構成一個噬菌斑(瓊脂凝膠中) 宿主細胞數遠遠大年夜于噬菌體數? 噬菌體效價(pfu/ml)= 噬菌斑數×10×稀釋

  3、試驗道理 一個噬菌體→侵染宿主細胞→惹起裂解→分散重復侵染裂解→構成一個噬菌斑(瓊脂凝膠中) 宿主細胞數遠遠大年夜于噬菌體數? 噬菌體效價(pfu/ml)= 噬菌斑數×10×稀釋倍數 4、試驗步調 1、制備底層平板 將已滅菌消融的牛肉膏蛋白胨固體培養基平板6個(倒薄一些),凝集。 2、參與大年夜腸桿菌敏感菌 在每個牛肉膏蛋白胨固體培養基平板上,無菌條件下,各皿參與敏感菌菌懸液0.9mL。 3、稀釋噬菌體 取1mL含噬菌體液參與到 9mL牛肉膏蛋白胨培養液中,采取10倍稀釋法,辨別制備噬菌體稀釋液(10-7、 10-8 、 10-9 )。 4、噬菌體與大年夜腸桿菌敏感菌混淆 將已加有大年夜腸桿菌敏感菌6皿平板( 10-7 、 10-8 、 10-9各2皿)中,辨別參與0.1mL噬菌體稀釋液,混淆后放置5分鐘。 5、參與下層培養基 將5mL熔解的半固體培養基中敏捷倒入含噬菌體與大年夜腸桿菌敏感菌平板中(45~50℃),并混淆平均。活動凝集。 6、培養 37℃培養5小時或室溫培養12小時。 7、不美觀察、計數 不美觀察平板中的噬菌斑,將每稀釋度的噬菌斑構成單位(pfu)記錄于表格內。 8、計算噬菌體的效價 依照六個計數準繩選擇,計算每毫升未稀釋的原液的噬菌體效價。 噬菌體效價(pfu/ml)= 噬菌斑數×10× 稀釋倍數 試驗步調框圖(教員停止演示操作) 用牛肉膏蛋白胨固體培養基倒平板6皿(薄一點) 噬菌體稀釋液(10-7、10-8、10-9)0.1mL,各2皿 敏感菌菌懸液0.9mL 放入已有底層固體培養基的平板中 混勻放置5分鐘 將5mL熔解的半固體培養基中倒入上述平板中(45~50℃) 混勻(舉措?) 37℃培養4小時或室溫培養12小時 不美觀察結果計數 ① ② ③ ④ ⑤ ⑧ ⑦ ⑥ 教科書引見方法的操作步調 噬菌體稀釋液0.1ml 宿主培養液0.9ml 45~48℃熔解好牛肉膏蛋白胨半固體培養基4ml 混勻吸附5min 搓動混勻后倒于有底層的平板中 鋪平 37 ℃培養5~6小時,不美觀察計數 在無菌空試管中混勻下層后(3種成分),再倒入底層 上鋪平。 思考題 噬菌體稀釋度 10-7 10-8 10-9 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 pfu數/平板 每毫升中的pfu數 1、記錄結果,并停止統計剖析。 2、甚么要素決定噬菌斑的大年夜小? 3、假設在你的測定平板上,偶然出現其他細菌的菌落,可否影響你的噬菌體效價測定? 4、噬菌體效價測定試驗中所用操作方法和書上引見的操作方法比擬有甚么優缺點? 下周試驗內容 微生物(細菌)的罕見心理生化反應 要點: 1、控制停止微生物大年夜分子水解試驗的道理和方法。 2、了解糖發酵的道理和在細菌判定中的主要感化。 3、控制經過糖發酵(葡萄糖、蔗糖、乳糖)辨別分歧微生物的方法。 4、了解IMViC(吲哚、甲基紅、伏-普、檸檬酸)與硫化氫反應的道理及其在腸道菌判定中的意義和方法。 實 驗 九 噬菌體效價的測定 目標請求 1、控制噬菌體效價測定的道理及方法 2、不美觀察噬菌斑的形狀 實 驗 內 容 一 培養基和試驗物品的準備 本次試驗準備任務(2人/組) 1、配制牛肉膏蛋白胨液體培養液( pH 7.4-7.6 ); (已準備好)。 2、測定效價時稀釋用9ml牛肉膏蛋白胨液體培養液—— 3支/組,分裝于18×180mm試管; 3、牛肉膏蛋白胨固體培養基(1.5%的瓊脂)——底層用,100ml/組,裝于250ml三角瓶, (用于制備6個無菌平板,倒薄一點) 4、下層用5ml牛肉膏蛋白胨半固體培養基(0.8 %的瓊脂),消融后分裝于15×150mm試管中加塞包扎滅菌,6支/組; (教員已準備好) 5、1ml無菌吸管 5支/組。 實 驗 內 容 二 噬菌體常識引見 1、幾個主要概念 1、噬菌體: 是感染細菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒,散布極廣,集體很小,在光學顯微鏡下看不見,需用電鏡不美觀察。 分歧的噬菌體在電鏡下有三種形狀:蝌蚪形、微球形和絲形。大年夜少數噬菌體呈蝌蚪形,由頭部和尾部兩局部構成。 2、噬菌斑: 在混濁的細菌菌面(菌苔)上構成的透明區域,是由噬菌體不時侵染宿主細胞裂解構成的,其外形、大年夜小不等。 3、噬菌體效價: 指1mL樣品中所含具有侵染活性的噬菌體(烈性噬菌體)數量——噬菌斑構成單位(pfu,plaque-forming unit)。 效價(titre,titer)這一名詞在分歧的場合有其分歧的含義(如抗生素等)。 2、病毒粒子的結構(模型) 噬菌

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